Ilmu Kamar Hitung

Hitung

Area yang dihitungKotak aktif (ketuk kotak untuk memilih)

Kotak

Total sisi A

Papan ketik: 1/2 tambah sel · →/← pindah kotak · Z batal

Hasil

Pengaturan

Faktor pengenceran (FP)

Kendali mutu hitungan

Sebaran sel per kotak

Garis putus-putus: rerata. Pita hijau-biru: rerata ± 2√rerata (sebaran acak Poisson yang wajar).

Dasar

Anatomi kamar hitung Improved Neubauer

Kamar hitung adalah kaca objek tebal dengan ruang setinggi 0,1 mm di bawah kaca penutup. Di dasarnya terukir kisi berukuran pasti. Karena luas kisi dan tinggi ruang diketahui, jumlah sel yang terlihat dapat diubah menjadi jumlah sel per mikroliter.

Ketuk keterangan di samping untuk menyorot bagian kisi.

Penampang samping

Rumus umum

Sel/µL = N × FP ÷ (A × t)N = jumlah sel terhitung · FP = faktor pengenceran · A = luas yang dihitung (mm²) · t = tinggi ruang (0,1 mm Neubauer; 0,2 mm Fuchs-Rosenthal)

Sel/mL = (N ÷ jumlah kotak besar) × FP × 10⁴Konvensi kultur sel dan pengolahan sel punca. Satu kotak besar = 0,1 µL = 10⁻⁴ mL.

Ukuran kisi

Bagian	Sisi	Luas	Volume	Dipakai untuk
Seluruh kisi Neubauer	3 mm	9 mm²	0,9 µL	LCS tanpa pengenceran
Kotak besar (W / tengah)	1 mm	1 mm²	0,1 µL	Leukosit, TNC, trypan blue, trombosit (tengah)
Kotak 1/16 dari W	0,25 mm	0,0625 mm²	0,00625 µL	Orientasi saat menghitung W
Kotak sedang (E)	0,2 mm	0,04 mm²	0,004 µL	Eritrosit, trombosit
Kotak kecil	0,05 mm	0,0025 mm²	0,00025 µL	Bantu hitung sel padat
Fuchs-Rosenthal, kotak besar	1 mm	1 mm²	0,2 µL	LCS (tinggi 0,2 mm)
Fuchs-Rosenthal, seluruh kisi	4 mm	16 mm²	3,2 µL	LCS sel sedikit

Ringkasan semua analisis

Analisis	Reagen	Pengenceran	Area dihitung	Volume	Faktor cepat
Leukosit	Türk	1 : 20	4 kotak W (4 mm²)	0,4 µL	N × 50
Trombosit	Amonium oksalat 1%	1 : 100	25 kotak sedang tengah (1 mm²)	0,1 µL	N × 1.000
Trombosit, 5 kotak	Amonium oksalat 1%	1 : 100	5 kotak sedang (0,2 mm²)	0,02 µL	N × 5.000
Eritrosit	Hayem	1 : 200	5 kotak sedang (0,2 mm²)	0,02 µL	N × 10.000
LCS, Neubauer	Tanpa / Samson 9 : 1	1 atau 1,11	9 kotak besar (9 mm²)	0,9 µL	N × 1,11 / N × 1,23
LCS, Fuchs-Rosenthal	Tanpa / Samson 9 : 1	1 atau 1,11	16 kotak besar, t 0,2 mm	3,2 µL	N ÷ 3,2 / N ÷ 2,88
TNC produk HSCT	Türk	1 : 100–200	4 kotak W	0,4 µL	N × 250 / N × 500
Viabilitas sel	Trypan blue 0,4% (1 : 1)	2 × pengenceran awal	4 kotak W	0,4 µL	(N ÷ 4) × FP × 10⁴ /mL

Cara mengisi kamar hitung

Bersihkan kamar hitung dan kaca penutup khusus dengan alkohol 70%, keringkan dengan kain lembut bebas serat.
Letakkan kaca penutup di atas penyangga, tekan ringan sambil digeser sampai tampak cincin pelangi (cincin Newton). Ini tanda tinggi ruang tepat 0,1 mm.
Homogenkan pengenceran pelan 1–2 menit. Bila memakai pipet Thoma, buang 3–4 tetes pertama.
Sentuhkan ujung pipet di tepi kaca penutup. Biarkan cairan mengisi ruang dengan daya kapiler dalam satu kali alir (± 10 µL per sisi), tanpa meluap ke parit dan tanpa gelembung.
Diamkan agar sel mengendap: leukosit 2–3 menit; trombosit 10–15 menit di cawan petri lembap supaya tidak kering.
Fokuskan kisi dengan objektif 10× (leukosit, LCS, TNC) atau 40× (trombosit, eritrosit). Turunkan kondensor atau kecilkan diafragma supaya sel kontras. Trombosit paling jelas dengan fase kontras.
Hitung kotak demi kotak dengan pola zig-zag memakai counter, terapkan aturan L.
Hitung kedua sisi. Selisih ≤ 10% → pakai rerata. Lebih dari itu → isi ulang.
Dekontaminasi dan bersihkan kamar hitung setelah dipakai.

Aturan L

Sel yang menyentuh garis atas dan kiri dihitung; yang menyentuh garis bawah dan kanan tidak. Pada garis rangkap tiga, patokannya garis tengah. Dengan begitu tiap sel di perbatasan hanya dihitung sekali. Cincin hijau = dihitung, abu-abu = tidak.

Mengapa harus menghitung banyak sel

Sel tersebar acak di kamar hitung (distribusi Poisson). Galat hitung kira-kira 1/√N. Menghitung 100 sel memberi CV sekitar 10%; 400 sel sekitar 5%. Karena itu pengenceran dan jumlah kotak dipilih supaya N berada di sekitar 100–400 sel atau lebih.

CV galat hitung (%)

Jumlah sel yang dihitung (N), skala logCV = 100 ÷ √N

Tabel galat hitung

N dihitung	CV	Rentang 95% (± 1,96√N)

Kesalahan yang sering terjadi

Kesalahan	Akibat	Pencegahan
Kamar atau kaca penutup kotor, berlemak	Tinggi ruang bukan 0,1 mm; sel tidak rata	Bersihkan, pastikan cincin Newton terlihat
Memakai kaca penutup biasa (tipis)	Kaca melengkung, volume salah	Pakai kaca penutup khusus kamar hitung
Pengisian berlebih sampai parit	Hasil tinggi palsu	Isi sekali alir ± 10 µL
Pengisian kurang, ada gelembung	Hasil rendah, sebaran tidak merata	Bersihkan dan isi ulang
Pencampuran kurang	Sebaran antar kotak tidak merata	Homogenkan 1–2 menit sebelum mengisi
Tidak menunggu sel mengendap	Sel di bidang fokus lain terlewat	Tunggu 2–3 menit (leukosit), 10–15 menit (trombosit)
Kering selama menunggu	Sel mengerut, muncul kristal	Simpan di cawan petri lembap
Aturan L tidak konsisten	Sel perbatasan dihitung dua kali atau terlewat	Selalu atas–kiri dihitung, bawah–kanan tidak
Salah pipet atau salah FP	Galat sistematik pada semua hasil	Mikropipet terkalibrasi; tulis FP di formulir
Reagen kotor atau berkristal	Debris terhitung sebagai trombosit	Saring reagen, buat segar, periksa blanko reagen (harus ± 0)

Fokus utama

Hitung trombosit manual

Amonium oksalat 1% melisiskan eritrosit, sedangkan leukosit dan trombosit tetap utuh. Trombosit tampak bulat atau lonjong, 2–4 µm, berkilau (refraktil). Dengan mikroskop fase kontras tampak keunguan bercahaya, sehingga mudah dibedakan dari debris.

Prosedur

Darah EDTA, diperiksa sebaiknya dalam 1–2 jam. Periksa dulu adanya bekuan kecil.
Pipet 20 µL darah ke 1.980 µL amonium oksalat 1% (pengenceran 1 : 100). Campur pelan 10–15 menit supaya eritrosit lisis sempurna.
Isi kedua sisi kamar hitung.
Diamkan 10–15 menit di cawan petri berisi kertas saring basah agar trombosit mengendap di satu bidang fokus.
Objektif 40×, kondensor diturunkan (atau fase kontras). Hitung 25 kotak sedang di kotak besar tengah.
Hitung sisi A dan B; selisih ≤ 10%.
Konfirmasi dengan estimasi dari apusan darah tepi.

Memilih pengenceran

Perkiraan trombosit	Pengenceran	Area	Faktor
< 50 × 10³/µL	1 : 20	25 kotak sedang (1 mm²)	N × 200
50–500 × 10³/µL	1 : 100	25 kotak sedang (1 mm²)	N × 1.000
50–500 × 10³/µL	1 : 100	5 kotak sedang (0,2 mm²)	N × 5.000
> 500 × 10³/µL	1 : 200	25 kotak sedang (1 mm²)	N × 2.000
Konsentrat trombosit (TC)	1 : 200	5 kotak sedang	N × 10.000

Sel terhitung di 25 kotak sedang (N), skala log

1 : 201 : 1001 : 200Zona hijau: N 100–400

Jumlah trombosit sebenarnya (× 10³/µL), skala log

Contoh perhitungan

Contoh 1

Trombosit normal, 25 kotak

Pengenceran: 1 : 100 → FP = 100
Area: 25 kotak sedang = 1 mm²
Volume: 1 mm² × 0,1 mm = 0,1 µL
N: Sisi A 236, sisi B 252 → rerata 244
Selisih sisi: |236 − 252| ÷ 244 = 6,6% (≤ 10%, diterima)
Hasil: 244 × 100 ÷ 0,1 = 244.000/µL

Contoh 2

Trombositopenia berat

Pengenceran: 1 : 20 (20 µL darah + 380 µL reagen)
Area: 25 kotak sedang = 1 mm², 0,1 µL
N: Sisi A 31, sisi B 27 → rerata 29
CV hitung: 100 ÷ √58 = 13% (N kecil)
Hasil: 29 × 20 ÷ 0,1 = 5.800/µL
Saran: Tambah area: hitung 9 kotak besar (0,9 µL) agar N lebih besar

Contoh 3

Trombositosis, 5 kotak

Pengenceran: 1 : 200
Area: 5 kotak sedang = 0,2 mm², 0,02 µL
N: 98
Hasil: 98 × 200 ÷ 0,02 = 980.000/µL

Contoh 4

QC konsentrat trombosit (TC) di UPDRS

Pengenceran: 1 : 200, hitung 5 kotak sedang
N: 128
Konsentrasi: 128 × 200 ÷ 0,02 = 1.280.000/µL = 1,28 × 10⁹/mL
Volume TC: 50 mL
Isi per kantong: 1,28 × 10⁹ × 50 = 6,4 × 10¹⁰ = 64 × 10⁹
Acuan: ≥ 60 × 10⁹ per unit dari darah lengkap (acuan umum; ikuti standar yang berlaku)

Cek silang dengan apusan darah

Rerata trombosit per lapang minyak imersi (10 lapang, area eritrosit tidak bertumpuk) dikali 20.000. Sebagian lab memakai 15.000.

Rerata trombosit per lapang

Faktor

Koreksi tabung sitrat

Bila pseudotrombositopenia EDTA dicurigai, ulangi dengan darah sitrat. Sitrat mengencerkan darah 9 : 1, sehingga hasil dikali 1,1.

Hasil dari tabung sitrat (/µL)

Kapan hitung manual diperlukan

Situasi	Masalah pada hematology analyzer	Tindakan
Pseudotrombositopenia EDTA (gumpalan, satelitisme)	Rendah palsu	Apusan; ulang dengan sitrat (× 1,1); hitung manual
Trombosit raksasa (mis. Bernard–Soulier, ITP)	Terbaca sebagai eritrosit → rendah palsu	Hitung manual, fase kontras
Fragmen eritrosit, mikrositosis berat	Terbaca sebagai trombosit → tinggi palsu	Hitung manual dan apusan
Krioglobulin, fragmen sel leukemia	Tinggi palsu	Apusan, hitung manual
Trombosit sangat rendah untuk keputusan transfusi	Presisi alat menurun di nilai rendah	Verifikasi 1 : 20, hitung kedua sisi

Membedakan trombosit dari benda lain

Benda	Ciri	Dihitung?
Trombosit	Bulat/lonjong 2–4 µm, berkilau, di bidang fokus kisi	Ya
Gumpalan trombosit	Kelompok tak beraturan	Tidak; ulang sampel
Debris, kristal reagen	Bentuk bersudut, tidak berkilau, ukuran bervariasi	Tidak
Leukosit	Jauh lebih besar (10–15 µm), berinti	Tidak
Gelembung kecil	Tepi gelap tebal, tengah terang	Tidak

Nilai rujukan

Dewasa umumnya 150.000–400.000/µL (150–400 × 10³/µL). Gunakan nilai rujukan laboratorium Anda. Selisih hasil manual dan estimasi apusan ≤ 25% lazim dianggap sesuai.

Fokus utama

Hitung sel cairan serebrospinal

Sel dalam LCS cepat rusak, terutama granulosit. Hitung dalam 1 jam setelah pengambilan, tanpa disentrifus, dari tabung yang paling sedikit tercemar darah (umumnya tabung ketiga). LCS jernih dihitung tanpa pengenceran; LCS keruh diencerkan dulu.

Memilih kamar hitung

Kamar	Kisi	Tinggi	Volume dihitung	Tanpa pengenceran	Samson 9 : 1 (FP 1,11)
Improved Neubauer	9 kotak besar (9 mm²)	0,1 mm	0,9 µL	N ÷ 0,9 = N × 1,11	N × 1,111 ÷ 0,9 = N × 1,23
Fuchs-Rosenthal	16 kotak besar (16 mm²)	0,2 mm	3,2 µL	N ÷ 3,2	N × 1,111 ÷ 3,2 = N ÷ 2,88 (≈ N ÷ 3)
Neubauer, LCS keruh	4 kotak W (Türk 1 : 20)	0,1 mm	0,4 µL	N × 20 ÷ 0,4 = N × 50

Fuchs-Rosenthal menghitung volume 3,5 kali lebih besar daripada Neubauer, sehingga galat hitung lebih kecil pada LCS dengan sel sedikit.

Prosedur

Catat warna dan kejernihan LCS. Campur pelan dengan membolak-balik tabung.
LCS jernih: isi langsung kamar hitung. Untuk membedakan sel, campur 9 bagian LCS + 1 bagian larutan Samson (FP 1,11); tunggu ± 5 menit.
Larutan Samson (fuksin, fenol, asam asetat) mewarnai inti merah muda dan melisiskan eritrosit.
Isi kedua sisi, diamkan 5 menit di cawan lembap.
Objektif 10× untuk menghitung, 40× untuk membedakan mononuklear (MN) dan polimorfonuklear (PMN).
Hitung seluruh 9 kotak besar (Neubauer) atau 16 kotak (Fuchs-Rosenthal) dengan dua tombol counter: MN dan PMN.
Bila sel > 200/µL, hitung jenis sebaiknya dari sediaan sitospin berwarna Wright/Giemsa.

Nilai normal menurut usia

Usia	Leukosit LCS	Sel dominan
Neonatus	0–30 /µL	Monosit, limfosit
1–4 tahun	0–20 /µL	Limfosit, monosit
5 tahun – pubertas	0–10 /µL	Limfosit, monosit
Dewasa	0–5 /µL	Limfosit ± 70%, monosit

Eritrosit normal 0/µL. Neutrofil pada LCS normal dewasa jarang. Ikuti rujukan laboratorium Anda.

Contoh perhitungan

Contoh 1

Neubauer, tanpa pengenceran

Area: 9 kotak besar = 9 mm²
Volume: 9 × 0,1 = 0,9 µL
N: 27 sel
Hasil: 27 ÷ 0,9 = 30 sel/µL
Tafsir: Meningkat untuk dewasa (normal 0–5)

Contoh 2

Fuchs-Rosenthal + Samson

Pengenceran: 9 LCS + 1 Samson → FP 10/9 = 1,111
Volume: 16 mm² × 0,2 mm = 3,2 µL
N: 48 (MN 36, PMN 12)
Hasil: 48 × 1,111 ÷ 3,2 = 16,7 sel/µL
Hitung jenis: MN 36/48 = 75% · PMN 12/48 = 25%

Contoh 3

LCS keruh

Pengenceran: Türk 1 : 20
Area: 4 kotak W = 0,4 µL
N: 210
Hasil: 210 × 20 ÷ 0,4 = 10.500 sel/µL
Tafsir: Pola meningitis bakteri bila PMN dominan

Contoh 4

Koreksi pungsi traumatik

LCS: Leukosit 150/µL, eritrosit 21.000/µL
Darah: Leukosit 7.000/µL, eritrosit 4,2 × 10⁶/µL
Leukosit dari darah: 7.000 × 21.000 ÷ 4.200.000 = 35/µL
Terkoreksi: 150 − 35 = 115 sel/µL

Kalkulator koreksi pungsi traumatik

Leukosit LCS (/µL)

Eritrosit LCS (/µL)

Leukosit darah (/µL)

Eritrosit darah (× 10⁶/µL)

Rumus: leukosit terkoreksi = leukosit LCS − (leukosit darah × eritrosit LCS ÷ eritrosit darah). Aturan praktis: ± 1 leukosit per 500–1.000 eritrosit.

Rentang leukosit LCS menurut penyebab

NormalDominan MN (limfosit)Dominan PMN

Rentang tipikal dan saling tumpang tindih. Diagnosis tetap memerlukan glukosa, protein, pewarnaan, kultur, dan uji molekuler.

Pola LCS pada meningitis

Pola	Leukosit tipikal (/µL)	Sel dominan	Glukosa	Protein
Normal dewasa	0–5	Limfosit, monosit	Normal (± 60% glukosa darah)	15–45 mg/dL
Bakteri	100–10.000 (sering > 1.000)	PMN	Sangat turun	Sangat naik
Virus	10–1.000 (sering < 300)	Limfosit (awal bisa PMN)	Normal	Normal / naik ringan
Tuberkulosis	50–500	Limfosit, campuran	Turun	Sangat naik
Jamur (kriptokokus)	20–500	Limfosit	Turun / normal	Naik

Darah

Hitung leukosit

Larutan Türk berisi asam asetat 2–3% yang melisiskan eritrosit dan gentian violet yang mewarnai inti leukosit. Darah diencerkan 1 : 20 lalu dihitung di 4 kotak besar sudut (W).

Prosedur

20 µL darah EDTA + 380 µL larutan Türk (1 : 20). Campur 1–2 menit.
Isi kedua sisi kamar hitung, diamkan 2–3 menit.
Objektif 10×. Hitung 4 kotak W dengan pola zig-zag dan aturan L.
Selisih antar kotak W tidak boleh mencolok; selisih sisi A–B ≤ 10%.

Pengenceran menurut jumlah leukosit

Keadaan	Pengenceran	Faktor (4 W)
Leukopenia (< 2.000/µL)	1 : 10	N × 25
Normal	1 : 20	N × 50
Leukositosis (> 30.000/µL)	1 : 100	N × 250
Hiperleukositosis (> 100.000/µL)	1 : 200	N × 500

Contoh 1

Leukosit normal

Pengenceran: 1 : 20
N per kotak: W1 42 · W2 38 · W3 45 · W4 40
N total: 165
Volume: 4 mm² × 0,1 mm = 0,4 µL
Hasil: 165 × 20 ÷ 0,4 = 8.250/µL

Contoh 2

Koreksi eritrosit berinti (NRBC)

Hitung kamar: 15.000/µL (NRBC ikut terhitung)
NRBC: 25 per 100 leukosit (dari apusan)
Terkoreksi: 15.000 × 100 ÷ 125 = 12.000/µL

Kalkulator koreksi NRBC

Leukosit hasil hitung (/µL)

NRBC per 100 leukosit

Terapi sel

Kamar hitung dalam pengolahan HSCT dan terapi sel punca

Pada produk sel punca, kamar hitung dipakai untuk verifikasi jumlah sel berinti total (TNC), viabilitas dengan trypan blue, hitung ulang setelah pengolahan, recovery pasca-pencairan, dan panen kultur sel punca mesenkimal (MSC). Sel CD34+ dihitung dengan flow cytometry (ISHAGE); pada cara dual platform, angka TNC dari hitungan inilah pengalinya.

Alur pengolahan produk

PengumpulanApheresis PBSC, panen sumsum tulang, atau darah tali pusat. Ambil sampel QC steril.
Kamar hitungHitung TNC (Türk)Verifikasi angka alat; produk pekat diencerkan 1 : 100–1 : 200.
Kamar hitungViabilitasTrypan blue 1 : 1, dibaca dalam 3–5 menit.
CD34+ flow cytometryDual platform: CD34+ absolut = % CD34+ × TNC.
Kamar hitungPengolahanReduksi volume, deplesi eritrosit/plasma, isolasi MNC Ficoll. Hitung ulang untuk recovery.
KriopreservasiDMSO akhir 10%. Konsentrasi sel akhir dihitung dari TNC.
Kamar hitungPencairanViabilitas dan recovery pasca-cair.
InfusDosis TNC/kg dan CD34+/kg berat badan pasien.

Jenis produk dan pengenceran Türk

Produk	TNC perkiraan	Pengenceran	Faktor (4 W)	Catatan
Panen sumsum tulang	10–30 × 10³/µL	1 : 20 – 1 : 50	N × 50 / N × 125	Banyak eritrosit dan partikel lemak; saring partikel
Apheresis PBSC	50–300 × 10³/µL	1 : 100 – 1 : 200	N × 250 / N × 500	Kental; pakai pipet balik (reverse pipetting)
Darah tali pusat	8–20 × 10³/µL	1 : 20	N × 50	NRBC ikut terhitung sebagai TNC
Suspensi MNC (Ficoll)	bervariasi	1 : 1 trypan (× pengenceran awal)	(N ÷ 4) × FP × 10⁴/mL	Cuci sisa Ficoll dan trombosit
Kultur MSC (panen)	0,3–2 × 10⁶/mL	1 : 1 trypan	(N ÷ 4) × 2 × 10⁴/mL	Sel besar, mudah menggumpal; resuspensi rata

Rentang TNC adalah perkiraan umum; ikuti validasi metode di laboratorium pengolahan sel Anda.

Sel terhitung di 4 kotak W (N), skala log

1 : 201 : 1001 : 200Zona hijau: N 100–400

TNC produk (× 10³/µL), skala log

Viabilitas trypan blue

Encerkan produk pekat dulu (mis. 1 : 100 dalam PBS) agar tiap kotak W berisi ± 50–100 sel.
Campur 10 µL suspensi + 10 µL trypan blue 0,4% (1 : 1). FP total = pengenceran awal × 2.
Isi kamar dan baca dalam 3–5 menit. Lebih lama, sel hidup ikut menyerap zat warna sehingga viabilitas rendah palsu.
Sel hidup: jernih, tepi berkilau. Sel mati: biru seluruhnya. Hitung terpisah dengan dua tombol counter.
Viabilitas = hidup ÷ (hidup + mati) × 100%.

Trypan blue menilai semua sel berinti. Viabilitas khusus CD34+ dinilai dengan 7-AAD pada flow cytometry.

Contoh perhitungan

Contoh 1

TNC produk apheresis

Pengenceran: Türk 1 : 200
N per kotak: W1 102 · W2 96 · W3 110 · W4 92 = 400
Konsentrasi: 400 × 200 ÷ 0,4 = 200.000/µL = 2,0 × 10⁸/mL
Volume produk: 250 mL
TNC total: 2,0 × 10⁸ × 250 = 5,0 × 10¹⁰
Per kg (60 kg): 8,3 × 10⁸ TNC/kg

Contoh 2

Dosis CD34+ (dual platform)

% CD34+ (flow): 0,8%
CD34+ total: 5,0 × 10¹⁰ × 0,008 = 4,0 × 10⁸
CD34+/kg: 4,0 × 10⁸ ÷ 60 = 6,7 × 10⁶/kg
Tafsir: Di atas batas minimal 2 × 10⁶/kg dan target 4–5 × 10⁶/kg

Contoh 3

Viabilitas trypan blue

Pengenceran: 1 : 100 PBS, lalu 1 : 1 trypan → FP 200
Hitungan 4 W: Hidup 380 · Mati 20
Viabilitas: 380 ÷ 400 × 100 = 95%
Sel hidup/mL: (380 ÷ 4) × 200 × 10⁴ = 1,9 × 10⁸/mL

Contoh 4

Recovery pasca-pencairan

Pra-beku: TNC 5,0 × 10¹⁰, viabilitas 95% → hidup 4,75 × 10¹⁰
Pasca-cair: TNC 4,2 × 10¹⁰, viabilitas 78% → hidup 3,28 × 10¹⁰
Recovery sel hidup: 3,28 ÷ 4,75 × 100 = 69%

Contoh 5

Volume kriopreservasi

TNC total: 5,0 × 10¹⁰
Target: 2,5 × 10⁸ sel/mL (contoh; ikuti SOP)
Volume akhir: 5,0 × 10¹⁰ ÷ 2,5 × 10⁸ = 200 mL
DMSO 10% akhir: Pekatkan produk ke 100 mL, tambah 100 mL larutan DMSO 20% perlahan dalam dingin

Contoh 6

Panen kultur MSC

Hitungan 4 W: Hidup 212 · Mati 14 (FP 2)
Sel hidup/mL: (212 ÷ 4) × 2 × 10⁴ = 1,06 × 10⁶/mL
Total (5 mL): 5,3 × 10⁶ sel hidup, viabilitas 93,8%
Population doubling: log₂(5,3 × 10⁶ ÷ 7,0 × 10⁵) = 2,92
Waktu ganda: 168 jam ÷ 2,92 = 57,5 jam

Kalkulator dosis produk

Jenis produk

TNC (/µL)

Volume produk (mL)

Berat badan pasien (kg)

% CD34+ (flow)

Viabilitas (%)

Dosis terhadap target

Target adalah acuan umum dalam literatur (PBSC: CD34+ minimal 2 × 10⁶/kg, optimal 4–5 × 10⁶/kg; sumsum tulang: TNC ≥ 2–3 × 10⁸/kg; darah tali pusat: TNC ≥ 2,5 × 10⁷/kg, CD34+ ≥ 1,5 × 10⁵/kg). Ikuti protokol unit transplantasi Anda.

Kalkulator recovery pasca-cair

TNC pra-beku (× 10¹⁰)

Viabilitas pra-beku (%)

TNC pasca-cair (× 10¹⁰)

Viabilitas pasca-cair (%)

Kalkulator passage MSC

Sel hidup di 4 W

Sel mati di 4 W

FP (trypan 1 : 1 = 2)

Volume resuspensi (mL)

Sel disemai sebelumnya

Lama kultur (jam)

Kepadatan semai (sel/cm²)

Flask berikutnya

Jumlah flask

Kurva pertumbuhan MSC

Data contoh: population doubling kumulatif per passage (P1–P5).

Population doubling kumulatif

Hari kulturKemiringan melandai = pertumbuhan melambat (senesens)

Sumber galat pada produk sel

Masalah	Pencegahan
Produk kental, pipet tidak akurat	Pipet balik, ujung pipet lebar, campur rata
NRBC (darah tali pusat) terhitung sebagai TNC	Koreksi dengan % NRBC dari apusan bila perlu
Gumpalan pasca-cair	DNase sesuai SOP, saring, hitung segera
Trypan dibiarkan terlalu lama	Baca dalam 3–5 menit
Granulosit mati setelah dibekukan	Viabilitas pasca-cair TNC lebih rendah dari CD34+; nilai dengan 7-AAD
MSC menggumpal saat panen	Resuspensi lembut, saring 40–70 µm bila perlu

Metode manual harus divalidasi dan dibandingkan dengan alat secara berkala (ISO 15189; FACT-JACIE untuk laboratorium pengolahan sel).

Latihan

Latihan aturan L

Ketuk setiap sel yang harus dihitung di dalam kotak bergaris rangkap tiga, lalu tekan Periksa. Ingat: sel yang menyentuh garis atas dan kiri dihitung, garis bawah dan kanan tidak.

Tampilkan bantuan garis (hijau dihitung, merah tidak)

Sel yang Anda tandai